Pokus I

Izolace a stanovení DNA ze sleziny

Chemikálie:10 g vepřové nebo hovězí sleziny, písek (nejlépe mořský), 1M roztok NaCl (cca 5,8 g/100ml vody), destilovaná voda, 0,5% roztok NaOH, difenylaminové činidlo - do 100 ml 1% roztoku difenylaminu v ledové  kyselině octové přidejte 2 × 75 ml koncentrované kyseliny sírové

Pomůcky: třecí miska,  tlouček, odměrný válec, kádinky, dřevěná tyčinka (špejle), kahan, zkumavka,  azbestová podložka, držák na zkumavku

Postup: 

Ve třecí misce rozetřete 10 g sleziny s trochou písku. Po dobu 15 minut přidávejte za  intenzivního roztírání 100 ml 1 M roztoku NaCl. Pokud je k dispozici centrifuga, odstřeďujte homogenát 10 minut (5 tisíc otáček za minutu/rpm). Pokud centrifugu nemáte, pokuste se opatrně oddělit kapalinu od zbytků sleziny. Získanou kapalinu slijte do odměrného válce, zjistěte její  objem a přelijte do kádinky (o cca desetkrát větším objemu). Nyní ke kapalině pomalu přidávejte  ledem vychlazenou destilovanou vodu (o objemu šestinásobku kapaliny) a roztok pomalu  míchejte dřevěnou tyčinkou (špejlí). DNA se začne na tyčince srážet ve formě bílých vláken.  Získanou DNA přeneste do zkumavky. Do zkumavky přidejte 1 ml 0,5% NaOH. Po promíchání  a rozpuštění přidejte 1 ml difenylaminového činidla a zahřívejte po dobu  10-20 min na vroucí  vodní lázni. Roztok se zabarví do modra.

Časová náročnost: 45 – 60 minut

Bezpečnost: kahan, roztok NaOH – žíravina, kyselina octová, koncentrovaná kyselina sírová